. При разработке и испытании той или иной рецептуры новой зубной пасты необходимо выяснить степень и динамику перехода активных компонентов зубных паст в ротовую жидкость и поверхностный слой эмали или слизистую оболочку полости рта и пародонт. При этом исследовании важно определить ротовой клиренс кальция, фосфата, фтора или других активных компонентов, поступающих в ротовую жидкость из испытуемой зубной пасты во время чистки зубов.

■ Определение ротового клиренса. У практически здоровых лиц молодого возраста утром натощак после полоскания рта собирают в мерную пробирку не менее 5,0 мл слюны. Затем проводится чистка зубов испытуемой зубной пастой не менее 3 минут. После этого в течение 2 часов, каждые 15 минут, у испытуемых собирают в мерную пробирку не менее 2,5 мл ротовой жидкости. В собранных пробах ротовой жидкости после ее центрифугирования или фильтрования определяют кальций, фосфор, фтор или другие активные добавки, входящие в рецептуру пасты. По результатам анализа строится график клиренса.

■ Кальций в ротовой жидкости определяют на атомно-абсорбционном спектрофотометре. Предварительно 0,1 мл центрифугата ротовой жидкости разводят в 10 раз 0,10% раствором двунатриевой соли ЭДТА (буфером).

■ Неорганические фосфаты в ротовой жидкости определяют микрометодом Chen, Toribara, Warner (1956) в модификации (Персиц М. М., Колесник А. Г., 1976). 2,5% водный раствор молибденово-кислого аммония смешивают с 1Н-раствором серной кислоты и 10% раствором аскорбиновой кислоты в соотношении 1:8:1. Реакционную массу тщательно перемешивают. К 10 мкл пробы фильтрата или центрифугата ротовой жидкости добавляют 3,0 мл смеси реактивов. Одновременно с пробой готовят серию стандартных растворов, содержащих 1 -5 мкг фосфора. Все пробы и стандарты инкубируют в термостате при 37°С в течение 1,5 часов. Окрашенные растворы фотометрируют при длине волны 820 нм. Концентрацию фосфора в пробе рассчитывают по калибровочной кривой.

■ Фтор в ротовой жидкости определяют электрохимическим методом фтор-селективным электродом. Предварительно пробы ротовой жидкости так же, как стандартные растворы фтористого натрия (для калибровки электрода), разводят в соотношении 1:1с ацетатным буфером (рН 4,7) или другим буфером, регулирующим общую ионную силу (TISAB).

Концентрацию фтора в пробах ротовой жидкости определяют по калибровочному графику, построенному на полулогарифмической бумаге или вычисляют по формуле:

С_>p = (C_>сm•∆E) / S

где:

С_>ст – концентрация фтора в стандартном растворе в районе пробы;

∆Е – разница между потенциалом стандартного раствора и потенциалом в растворе пробы;

S – крутизна характеристики электрода (электродная функция фторидного электрода), равная 55—58 мВ при 10-кратном изменении концентрации фторид-иона.

■ Определение включения фтора в эмаль из зубной пасты проводится на удаленных зубах, а также в клинике (in vitro или in vivo).

Пробу эмали получают кислотной биопсией по методу Hotz, Muhlemann, Schait (1970) в модификации М. М. Персица (1974). Эта методика позволяет получить данные о послойном приросте концентрации фтора в поверхности эмали на глубине 5—12 мкм. Биопсию эмали проводят путем наложения на созданное тем или другим способом «окно» на поверхности эмали диска из фильтровальной бумаги, смоченной 5,0 мкл 0,5 М хлорной кислоты, на 20—30 секунд. Затем диск переносят в полиэтиленовую пробирку, которую предварительно наполняют 1,0 мл буфера TISAB (рН 5,25) и 1,0 мл раствора фтористого натрия (концентрация фториона – 0,1 мг/л). Фтор в пробах деминерализата эмали определяется электрохимическим способом фтор-селективным электродом. Предварительно фтор-селективный электрод калибруется стандартными растворами фтора – 0,1 мг/л; 1,0 мг/л; 10,0 мг/л.