I группа – чистый контроль (не применяют никаких манипуляций и средств),

II группа – контроль (чистка зубов щеткой или ватным тампоном без использования лекарственных средств),

III группа – контроль (использование плацебо-средства),

IV группа – опытная.

Возможно сокращение количества контрольных групп до 2. Бактериологический материал со слизистой оболочки полости рта (спинка языка, щека, твердое небо) забирают стерильными дисками из фильтровальной бумаги (диаметр 3,0—3,25 мм) утром до кормления животных. Зубоврачебным пинцетом диск плотно фиксируют до полного смачивания ротовой жидкостью (приблизительно 4,0—5,0 с). Зубной налет снимают с помощью зубоврачебного экскаватора до наполнения вогнутой рабочей части инструмента. Бактериологический материал, собранный бумажными дисками, и зубной налет тщательно гомогенизируют: диски растирают в фарфоровых ступах с небольшим количеством физиологического раствора и помещают в стерильные пробирки с 5 мл физиологического раствора; зубной налет в 5 мл физиологического раствора суспендируют в аппарате для встряхивания биологических жидкостей. Бактериальные суспензии по 0,1 мл высевают на твердые дифференциально-диагностические питательные среды и распределяют по поверхности среды стеклянным шпателем. В качестве дифференциально-диагностических сред используют агар с 5% дефибринированной кровью кролика, желточно-солевую среду по Чистовичу, среды Эндо, Сабуро, томатно-молочный агар и M.S.A. «Difco».

Посевы на M.S.A. «Difco» и томатно-молочном агаре инкубируют при 37°С от 48 до 72 часов в анаэробных условиях, на агаре с кровью, желточно-солевым и Эндо – 24 часа в аэробных условиях. На агаре Сабуро посевы инкубируют до 5 суток при 22—24°С. Проводят подсчет колоний и предварительную идентификацию полученных штаммов микроорганизмов по культуральным и морфологическим признакам. Для специальных исследований выделяют чистые штаммы микроорганизмов и проводят дальнейшее изучение качественной характеристики микробных видов.

Наблюдения за возможными изменениями количественного и качественного состава аутофлоры полости рта крыс проводят в динамике: до начала эксперимента (фоновые данные), через 2, 4, 6 и 9 недель.

Общие количественные сдвиги физиологической микробной флоры полости рта животных опытных групп, по сравнению о контрольными, не должны превышать абсолютного числа на 10—15 колоний микроорганизмов. Появление в посевах микроорганизмов, не свойственных здоровой полости рта экспериментальных крыс, таких как золотистый стафилококк с патогенными свойствами, протей и кишечная палочка, является показателем нежелательного воздействия изучаемой зубной пасты на аутофлору полости рта.

Б) Изучение сохранения жизнеспособности бактерий в зубных пастах при хранении Зубные пасты на протяжении 2 лет после выпуска не должны содержать патогенных микроорганизмов и не являться питательной средой для жизнедеятельности бактерий, которые смогут проникнуть в пасты в процессе использования.

Для данного исследования целесообразно применять следующие контрольные штаммы микроорганизмов: Staph, aureus 209, E.coli M-17, Candida albicans, Str. viridans N 1, Вас. subtillis N 720. Отдельные виды микроорганизмов в виде суспензии суточной культуры вносят бактериальной петлей в тубу (после предварительного частичного выдавливания). После этого тубы инкубируют при 37°С, затем содержимое выдавливают в чашку Петри, откуда материал забирают бактериальной петлей и делают посев в соответствующие питательные среды. Результаты расценивают как положительные при полном отсутствии микробного роста.