Когда духовные силы юной монахини укрепились, она оставила затвор. Покинув келью Софийского собора, Евфросиния поселилась при церкви Преображения для основания женского монастыря. Произошло это около 1128 года. Евфросиния стала наставницей и руководительницей для многих избравших иноческий путь. Год за годом основанный ею Спасо-Преображенский монастырь расширялся и укреплялся. Сестер обители Евфросиния «с радостию и прилежанием» обучала грамоте. В обители преподобная создала женскую школу – одну из первых на Руси, – которая способствовала быстрому росту монастыря.

В 1161 году усердием преподобной Евфросинии был воздвигнут каменный Спасо-Преображенский собор – одна из жемчужин древнерусского зодчества. Храм в перестроенном виде сохранился до наших дней. Строитель, мастер Иоанн, сам пришел к Евфросинии, наставленный Духом Святым, повелевшим ему принять участие в постройке собора.

Преподобная Евфросиния основала также Богородицкий мужской монастырь, построила в нем каменную церковь в честь Пресвятой Богородицы, украсила ее иконами и передала монахам. Воспользовавшись родством с византийским императором Мануилом Комнином (1143–1180), она обратилась к нему, а также к патриарху Константинопольскому Луке (1156–1169) с просьбой прислать для обители одну из величайших святынь – икону Божией Матери Ефесскую, написанную, по преданию, святым апостолом и евангелистом Лукой. Евфросиния отправила им дары, и в 1162 году икона прибыла на Русь вместе с благословенной патриаршей грамотой Полоцкой игуменье. Икону везли через Корсунь (Херсонес), где по просьбе жителей она пробыла около года, получив название Корсунской, и, наконец, была доставлена в Полоцк. В 1239 году дочь полоцкого князя Брячислава – Александра, выходя замуж за великого князя святого Александра Невского, взяла икону как благословение и подарила ее городу Торопцу, где состоялось венчание княгини.

В трудный век раздробленности Руси преподобная Евфросиния непрестанно молилась о единстве Русской земли, о победе над «тьмой разделения». Благодатным словом наставления, которое было ей «даром Бога», как повествует жизнеописатель, она примиряла многих князей, бояр и простых людей.

На склоне лет преподобная, предчувствуя скорую кончину, совершила паломничество на Святую Землю. Оставив монастырь на попечение сестры своей Евдокии, она вместе с племянником Давидом и сестрой Евпраксией отправилась в далекий путь. Во время пребывания в Константинополе преподобная, «войдя в великую церковь Святой Софии, помолившись и поклонившись всем святым Божиим церквям, получила благословение от патриарха, купила многоразличные фимиамы и золотую кадильницу и пошла в Иерусалим». Величайшей святыне христианства – Гробу Господню – преподобная Евфросиния жертвует драгоценную кадильницу – первый дар русских жен, вставший в единый ряд с лампадой, возжженной несколько десятилетий назад игуменом Даниилом от всей Русской земли. Дар преподобной был принят Господом. Знаком этого явилось исполнение ее желания быть погребенной на Святой Земле. Во время тяжелой болезни ей было возвещено Ангелом о близкой кончине. Она прославляла Бога за милость Его и с радостью ожидала указанного срока. Двадцать четыре дня провела она на одре болезни в одном из монастырей Иерусалима и скончалась 5 июня (23 мая) 1173 года, причастившись святых Христовых Таин, посреди молитвы. Предание сохранило последние слова молитвы преподобной: «Господи, приими дух мой от меня во Святом граде Твоем Иерусалиме и пресели меня в вышний град Твой Иерусалим». Тело почившей, согласно завещанию ее, было погребено сопровождавшими ее родственниками в обители преподобного Феодосия, на паперти храма Пресвятой Богородицы – там, где покоились матери преподобных Саввы и Феодосия, святого бессребреника Феодотия и многих святых жен. Давид и Евпраксия, возвратившись в Полоцк, принесли весть о блаженной кончине и погребении преподобной Евфросинии. С тех пор в день кончины ее ежегодно совершалось поминовение. Началось благоговейное почитание той, которая стала небесной покровительницей града Полоцка.