Желтая окраска срезов после регидратации может быть устранена обработкой в 5 %-м водном растворе тиосульфата натрия.

Пикриновая кислота – формалин-уксусная кислота. Эта предложенная Буэном смесь принадлежит к лучшим фиксирующим жидкостям. Относительно быстро проникающий фиксатор рекомендуется как для обзорных препаратов, так и для специальных исследований. Жидкость Буэна пригодна и для фиксации эмбрионов. Окрашиваемость тканей очень хорошая. Коллагеновые волокна в ней несколько набухают; жиры и липоидные вещества сохраняются хуже. Считается, что жидкость Буэна недостаточно хорошо фиксирует ткани почки (Меркулов Г. А., 1969).

Жидкость Буэна. Фиксатор готовится ex tempore из насыщенного 1,2 %-го водного раствора пикриновой кислоты, концентрированного формальдегида (35 – 40 %) и ледяной уксусной кислоты в соотношении 15: 5: 1. Продолжительность фиксации – около 24 ч при комнатной температуре. Возможно и более длительное (до нескольких суток) пребывание срезов в жидкости Буэна без ухудшения качества последующей окраски. После фиксации полагаются короткая промывка в воде (1 – 15 мин) и более длительная (до суток) – в 70 %-м этаноле, обезвоживание и заливка в парафин. Заливка в целлоидин нежелательна. После фиксации в жидкости Буэна срезы ярко окрашиваются кислыми красителями (эозином и др.) и несколько хуже воспринимают основные анилиновые красители. В связи с этим для окончательного удаления пикриновой кислоты после депарафинирования рекомендуют обработать срезы в 0,2 %-м водном растворе карбоната лития в течение 30 с (Коржевский Д. Э. [и др.], 2010).

При заливке в целлоидин материала, фиксированного по Буэну, часто обнаруживается, что даже после длительного пребывания в растворе целлоидина препараты пропитываются не полностью и крошатся при резке. Для устранения этого недостатка рекомендуется после 96 %-го спирта переносить препараты на 10 – 48 ч в следующую масляную смесь: 10 мл кедрового масла, 80 мл абсолютного спирта, 20 мл ориганового масла, 10 мл азотной кислоты. После этого объекты снова помещают на 24 – 48 ч в 96 %-й спирт, который сменяют 2 – 3 раза. Далее проводят те же манипуляции, как при целлоидиновой заливке. После такой обработки препараты хорошо режутся и не крошатся. Предполагается, что хрупкость объектов обусловлена образованием пикрата калия, который препятствует проникновению целлоидина; масляная смесь, содержащая азотную кислоту, растворяет и удаляет его (Ромейс Б., 1954).

1.2.9. Другие фиксаторы общего назначения

Полигексаметиленгуанидин относится к фиксаторам общего назначения, предложенным в последние годы. Он применяется (Аничков Н. М.[и др.], 2010) в виде 10 %-го водного раствора (время фиксации – 5 сут).

Ацетат меди (Арасланов С. А. [и др.], 2007), тоже фиксатор общего назначения, применяется в виде 0,2 М водного раствора, время фиксации в нем составляет 7 сут.

1.3. Фиксация материала для иммуноцитохимического исследования

Проведение иммуноцитохимического исследования возможно после фиксации материала в нейтральном растворе формалина, спирт-формалине, жидкостях Карнуа и Буэна, фиксаторах СФУ и B5. Наиболее устойчивые антигены могут быть выявлены и после продолжительной фиксации в обычном (не нейтральном) 10 %-м растворе формалина. Однако при использовании этих фиксаторов часть антигенов маскируется в связи с конформационными изменениями белков, экстракцией липидов, образованием перекрестных сшивок, модифицирующих антигенные детерминанты, снижается интенсивность иммуноцитохимической реакции на большинство антигенов.

С целью улучшить сохранность тканевых антигенов были предложены специальные фиксирующие смеси, которые наряду с фиксацией материала обеспечивают сохранность отдельных групп антигенов. Их использование вместо формалина позволяет во многих случаях добиться более эффективного выявления различных тканеспецифических белков, ферментов и онкомаркеров.