Все уговоры, обращенные к Анастасии, поклониться идолам, оказались тщетными. Диоклетиан стал придумывать ей какую-нибудь лютую казнь. Жрецу Ульпиану было поручено уговорить ее отречься от Христа или принудить ее к тому муками, а в случае неудачи казнить ее смертью и оставшиеся богатства отобрать в Капитолий (святилище Рима с главными храмами).

Великий жрец Ульпиан с почестью принял Анастасию к себе в дом и после долгих уговоров предложил ей такой выбор: с одной стороны он расположил драгоценные камни, с другой – обоюдоострые мечи; с одной – золотые ложа, украшенные драгоценной, хрустальной отделкой, с другой – железные раскаленные одры, полные горящих угольев; с одной – мониста, серьги, золотые, жемчужные уборы, а там – оковы, вериги, железные узы; здесь – светлые зеркала и всевозможные женские наряды, а там – железные гребни и рогатины, назначенные для того, чтобы разрывать тело; тут – драгоценные одеяния, там – острые осколки и деревянные опилки, которыми посыпали раны мучеников. Но никакими противоположностями и символами того, что ожидает ее, не смутил он мужественную мученицу. Посмотрев на предметы роскоши и драгоценности, она сказала: «Все это, диавол, твое и работающих на тебя, с которыми ты и будешь предан вечной гибели». Затем, с любовью смотря на вериги и орудия пытки, святая произнесла: «Окруженная этими предметами, я стану прекрасна и угодна вожделенному Жениху моему Христу; это я с радостью принимаю, а то отвергаю, это люблю ради возлюбленного Господа моего, а то ненавижу».

Три дня предлагал ей жрец на размышление, но она уверяла его, что другого ничего не придумает и что к мукам она стремится.

Ульпиан велел увести ее на эти три дня к знакомым женщинам ее круга, которые наперерыв уговаривали ее вернуться к отеческим богам, нашептывали ей сладостные речи о ее красоте, о прелестях мира, о любви знатных мужчин, о всем, что доставит ей ее знатный род, ее богатство, но она была, как глухая, которая не слышит, и как немая, которая не отверзает своих уст. За эти три дня она не вкушала ни пищи, ни пития и призывала всеми силами души своей своего бессмертного Жениха. Прошло три дня. Ульпиан осудил ее на муки, но сперва хотел насладиться ее красотою, когда же только к ней прикоснулся, вдруг ослеп. Страшная боль сжала ему голову и, как безумный, он вопил, взывая к своим богам, прося помощи. Он в отчаянии приказал свести себя в идольский храм, где надеялся получить исцеление, но там почувствовал себя еще хуже и умер.

Анастасия осталась свободной. Она пошла к своей духовной сестре Феодотии, все еще жившей в доме Левкадия, и рассказала ей о совершившейся над нею милости Божией. Вскоре вернулся Левкадий и возобновил свои искательства, но тщетно. Тогда он Анастасию заковал и предал суду, а Феодотию с ее детьми послал в узах к анфипату (высший областной начальник) Никитию. Тут во время допроса Феодотии старший сын ее, небольшой мальчик, на угрозы, обращенные судьей к его матери, воскликнул: «Мы, судия, не боимся мук, которые дают телу нетление, а душе бессмертие. Боимся только Бога, Который может и душу и тело погубить в геенне огненной».

За эти речи судья приказал его тут же при матери бить розгами до крови. Мать радовалась муке сына и укрепляла его божественными словами, увещевая его мужественно претерпеть эти страдания. Потом Феодотию отдали одному бесстыдному человеку, чтобы тот осквернил ее. Но, как только нечестивец хотел прикоснуться к ней, увидел стоящего возле светлого юношу, который грозно на него посмотрел и ударил так сильно, что он был окровавлен. Анфипат видел ясно это чудо, но вместо того, чтобы смириться перед Богом, еще более озверел.