Для лучшей десорбции микроорганизмов с почвенных частиц рекомендуется использовать метод замораживания – оттаивания почвы. Данный метод позволяет обнаружить в них в 1,2-3,6 раза больше актиномицетов, чем в тех же образцах без замораживания. Это, по-видимому, связано с повышением десорбции актиномицетов с поверхности почвенных частиц.
Применение питательных сред, содержащих антибиотики. При высеве почвенной суспензии на агаровые пластинки создаются трудности для развития редко встречающихся видов актиномицетов в результате быстрого развития бактерий и широко распространенных в почвах видов актиномицетов. Поэтому для целей направленного выделения определенных групп микроорганизмов в среды для высева почвенной суспензии добавляют различные антибиотики. При добавлении антибиотиков к среде для культивирования микроорганизмов происходит подавление обычной микрофлоры, создаются условия для развития устойчивых к этим антибиотикам форм микробов; последние могут оказаться новыми или редкими видами, способными образовывать и новые антибиотики. Для этих целей часто используют антибактериальные и противогрибные препараты.
Для выделения актиномицетов применяют среды, содержащие в своем составе такие антибиотики, как тетрациклины, неомицин, нистатин, стрептомицин, хлорамфеникол, пенициллин и др. При выделении продуцентов новых антибиотических веществ используют среды, содержащие стрептомицин в концентрациях от 25 до 100 мкг/мл и рубомицин – от 5 до 20 мкг/мл.
В случае добавления к среде стрептомицина наблюдается значительное подавление роста наиболее часто встречающихся видов – Str.griseovariabilis, Str.flavochromogenes, Str.griseolis, Str.aureofaciens, Str.griseus и др. – и выделение культур актиномицетов, которые не обнаруживались на той же среде без стрептомицина. С повышением концентрации стрептомицина в среде общее количество выделяемых актиномицетов уменьшается, однако при этом происходит выделение новых культур актиномицетов.
Рубомицин внесенный в среду для высева почвенной суспензии в значительной степени подавляет рост культур актиномицетов. Довольно устойчивыми к этому антибиотику оказались представители секций Roseus, Helvolo-Flavus и Albus. В указанных условиях в значительном числе вырастают культуры актиномицетов, не образующие воздушный мицелий.
В последнее время показано, что продуценты, например, аминогликозидных антибиотиков, могут быть найдены, в основном, только среди стрептомицетов, устойчивых к действию этих антибиотиков.
Известны и другие методы выделения микробов-антагонистов из естественных мест их обитания. По мнению некоторых микробиологов, к настоящему времени выделено и изучено не более 10 % всех имеющихся в природе микроорганизмов. Поэтому необходимо изучать и разрабатывать новые приемы выделения микробов, которые бы способствовали максимальному обнаружению их в природе.
3.3 Методы идентификации микроорганизмов продуцентов антибиотических веществ
После того как микроорганизм, обладающий ценными антибиотическими свойствами, тем или иным способом выделен из субстрата, необходимо определить принадлежность этого организма к определенному виду. Следовательно, исследователи должны владеть методами идентификации микроорганизмовпродуцентов антибиотиков. Известно, что определение видовой принадлежности микроорганизмов задача нелегкая, требующая больших навыков и умения.
При определении вида микроорганизма-продуцента антибиотического вещества используется большой комплекс признаков. В первую очередь используются признаки, легко наблюдаемые при культивировании организмов визуально или с помощью микроскопа, такие как