Иммунологические методы исследования основаны на обнаружении в моче обследуемой женщины хорионического гонадотропина. Наиболее часто применяется метод, основанный на торможении реакции гемагглютинации обработанных хорионическим гонадотропином в присутствии хорионического гонадотропина, содержащегося в моче беременных.

Основные этапы метода.

1. Иммунизация хорионическим гонадотропином кроликов для получения антисыворотки. Антигенную эмульсию готовят из растворенного хориогонина в дозе 300 ЕД в 0,4 мл изотопического раствора натрия хлорида и 0,6 мл вазелинового масла. Полученную эмульсию вводят крольчихам массой до 2,5 кг под кожу трижды, с интервалами между инъекциями в 2 недели. Через 2 недели после последней подкожной инъекции крольчихе вводят в ушную вену 3000 ЕД хориогонина. Через 10–12 дней титр антител в крови животного достаточен для проведения реакции.

2. Обработка антисыворотки.

Взятую у иммунизированной крольчихи из ушной вены кровь оставляют на сутки в холодильнике при температуре 4ºC. Через сутки верхний слой (антисыворотку) разливают в пробирки по 1,5 мл и помещают на 30 мин на водяную баню для инактивации при температуре – 56ºC. После обработки антисыворотки азидом натрия ее замораживают. В таком виде антисыворотка может храниться длительное время. Перед применением антисыворотку подвергают «истощению», для чего 1,5 мл ее смешивают с 0,75 мл формалинизированных эритроцитов и затем оставляют при комнатной температуре.

3. Обработка эритроцитов.

Для выполнения данной методики свежие эритроциты овцы отмывают фосфатно-солевым буферным раствором РН 7,2 и затем подвергают специальной обработке хорионическим гонадотропином.

4. Определение хорионического гонадотропина в исследуемой моче.

Утреннюю порцию мочи (2–5 мл) фильтруют через бумажный фильтр, затем готовят ее разведение 1:5. В две пробирки (опытную и контрольную) наливают по 0,25 мл разведенной мочи; затем в опытную пробирку добавляют 0,2 мл антисыворотки, в контрольную – 0,2 мл буферного раствора. Результаты реакции регистрируют через 1–1,5 ч. Если реакция не произошла (хорионический гонадотропин связал антитела), то диагноз беременности подтверждается в моче (содержит хорионический гонадотропин). Точность метода составляет 98–99 %.

К иммунологическим методам диагностики ранних сроков беременности относится реакция с диагностикумом гравимуном.

В основе метода лежит обнаружение в моче хорионического гонадотропина, являющегося антигеном в тесте торможения гемагглютинации в реакции «антиген – антитело».

Для проведения исследования утреннюю порцию мочи фильтруют; затем в ампулу с гравимуном добавляют 0,4 мл фосфатного буфера хлорида натрия и 2 капли мочи. Результат реакции оценивают через 2–3 ч.

Если исследуется моча беременной, то произойдет торможение реакции связывания «антиген – антитело» за счет присутствия хорионического гонадотропина. В пробирке эритроциты оседают на дне в виде узкого кольца или пуговицы, что свидетельствует о положительной реакции на беременность.

Таким образом, диагностика ранних сроков беременности основывается на совокупности предположительных и вероятных признаков, в том числе и иммунологических реакций на хорионический гонадотропин. Если диагноз беременности сомнителен, то подтвердить его можно при повторном обследовании через 2 недели при соответствии увеличения размеров матки гестационному сроку.

Диагностика поздних сроков беременности основывается на обнаружении достоверных признаков, свидетельствующих о наличии плода в матке:

1) прощупывание частей плода (определение головки, тазового конца, мелких частей);